Стволовые клетки
Стволовые клетки - недифференцированные клеточные элементы, обладающие свойствами самовозобновления и дифференцировки. Сам термин «стволовая клетка» ввел Санкт-Петербургский гематолог А. Максимов в 1908 году. Другим основоположником клеточной терапии был С.Воронцов, работавший в 20-е гг. в Париже. Большой вклад в исследования стволовых клеток в России в 60-70-е гг. сделали гематологи А.Фриденштейн и И.Чертков. Стволовые клетки могут классифицироваться в соответствии с их дифференцировочным потенциалом.1) Тотипотентные клетки способны формировать все эмбриональные и экстра-эмбриональные типы клеток. К ним относятся только оплодотворённый ооцит и бластомеры 2 – 8 клеточной стадии.
2) Плюрипотентные клетки способны формировать все типы клеток эмбриона. К ним относятся эмбриональные стволовые клетки, первичные половые клетки и клетки эмбриональных карцином.
3) Другие типы стволовых клеток локализуются в сформировавшихся тканях взрослого организма (adult stem cells). Они варьируют по способности к дифференцировке от мульти- до унипотентных.
Однако в последние годы чаще используется классификация стволовых клеток по источникам выделения стволовых клеток: эмбриональные, фетальные (выделенные из абортивного материала) и стволовые клетки взрослого организма.
 |  |  |
Первое применение стволовых клеток пуповинной крови в качестве аналога костного мозга произошло в 1988 году в Париже, когда ребенку с анемией Фанкони была произведена трансплантация стволовых клеток, собранных и выделенных из пуповинной крови сестры.
С этого момента по всему миру - сначала в США и в Европе, а затем и в России, начали создаваться банки пуповинной крови, проводиться сотни исследований с применением терапии стволовыми клетками пуповинной крови.
В 2005 году компания «Транс-Технологии» получила лицензию Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития на применение новых клеточных технологий в здравоохранении, после чего был открыт первый в Санкт-Петербурге Банк стволовых клеток. За время работы, компанией был накоплен огромный опыт, как по хранению, так и по трансплантации стволовых клеток.
Сбор пуповинной крови абсолютно безопасная и быстрая процедура, поскольку не происходит физического контакта с матерью и ребенком. До момента помещения концентрата стволовых клеток пуповинной крови на постоянное криогенное хранение осуществляется следующая технологическая цепочка:
1. Сбор пуповинной/плацентарной крови;
2. Тестирование и типирование крови;
3. Выделение стволовых клеток;
4. Расфасовка и маркировка стволовых клеток;
5. Карантинное хранение;
6. Хранение концентрата стволовых клеток пуповинной крови.
Сбор пуповинной/плацентарной крови
Сбор пуповинной крови осуществляется специально обученным персоналом родильного дома или специалистом банка стволовых клеток. Процедура сбора пуповинной крови очень проста: сразу после рождения ребенка пуповина пережимается зажимом. Врач обрабатывает пуповинный канатик дезинфицирующими растворами, чтобы уменьшить риск контаминации. Далее доктор пунктирует пуповинную вену иглой, подсоединенной к стерильной системе для забора крови. Кровь из пуповины и плаценты самотеком поступает в контейнер с антикоагулянтом.
Вся процедура занимает несколько минут. При естественных родах забор может осуществляться как до рождения плаценты, так и после. В случае родоразрешения методом кесарева сечения, забор крови происходит только после отделения плаценты.
Тестирование крови на стерильность и типирование
По прибытии в лабораторию до того, как начнется выделение стволовых клеток, из каждого образца собранной крови отбирается 8 мл для проведения лабораторных тестов и типирования.
Типирование – тестирование пуповинной крови по составу - проводится на современном проточном цитофлуориметре, что позволяет снизить объем расходуемого материала до 1 мл. После проведения типирования будет определено количество стволовых клеток и общее количество клеток в образце.
Следующим этапом проводится тестирование крови на стерильность. Отобранная в лаборатории кровь отправляется в сертифицированную лабораторию, где проводят анализы. Если результаты всех тестов отрицательны, то кровь перемещается на постоянное хранение, а Вам заказным письмом с уведомлением или курьером отправляется Паспорт пуповинной крови. Если положительным окажется результат микробиологического «посева», то кровь будет помещена на хранении после Вашего согласия, а в случае выдачи клеточного материала, он будет дополнительно обработан специалистами нашего Банка. При получении положительного результата RW, Anti-HCV, HBs-Ag, Anti-HIV–1, -2 будет дополнительно отобран еще один образец для проведения лабораторного тестирования в референсной лаборатории. При повторном получении положительного анализа кровь будет утилизирована в соответствии с Приказом Министерства Здравоохранения РФ о 25 июля 2003 года № 325, и Вам будет направлено уведомление с результатами анализов, если результат отрицателен образец будет помещен на постоянное хранение.
Выделение стволовых клеток
Выделение стволовых клеток из пуповинной крови сложный многоэтапный процесс. Все манипуляции с клеточным материалом проводятся в специальных сертифицированных «чистых» помещениях, оснащенных системой подачи стерильного воздуха. Квалифицированные специалисты работают с применением только одноразовых материалов. После того, как отобран материал для тестирования и типирования. В пакет с пуповинной/плацентарной кровью вводят специальные реагенты для осаждения эритроцитов. После осаждения эритроцитов фракцию содержащую гемопоэтические стволовые клетки перемещают с помощью плазмоэкстрактора в мешок для хранения. Контейнер с эритроцитами удаляется. Пакет с клеточной массой центрифугируют, для отделения излишков плазмы, которая помещается в стерильные пробирки и сохраняется отдельно. К клеточной массе добавляют криопротекторы, которые защищают клетки от гибели при замораживании.
Расфасовка и маркировка стволовых клеток
Один из последних этапов в работе с клеточным материалом это помещение выделенных и обработанных стволовых клеток в специальные пакеты для заморозки, предварительно отобрав 2 мл для двух ампул спутников. Как только контейнер с пуповинной кровью поступает в нашу лабораторию, ему сразу же присваивается уникальный идентификационный номер – штрих-код, который также проставляется на всю документацию и расходные материалы, в которых будет происходить дальнейшее хранение. Пакет и ампулы спутники помещаются в специальный программный криозамораживатель, в котором они постепенно охлаждаются до температуры -80˚С, далее хранение производится в парах жидкого азота.
Карантинное хранение
После полной заморозки пакет с клетками и ампулы-спутники помещают в карантинное криохранилище. Карантинное хранение осуществляется до получения результатов лабораторных тестов о чистоте клеточного материала. Только проверенные по всем показателям образцы могут помещаться на постоянное хранение.
Хранение стволовых клеток
По истечении срока карантинного хранения, когда проведены все необходимые тесты, пакет с клетками и ампулы-спутники перемещается на постоянное хранение в криохранилище. В течение многих лет клетки будут храниться в так называемых криобоксах, где в парах жидкого азота при температуре -196˚С будут находится маркированные пакеты. При сверхнизких температурах клетки могут сохранять свою жизнеспособность и биологическую активность в течение длительного, практически неограниченного времени.
Клеточная терапия – новый метод лечения заболеваний связанных с необратимой гибелью клеточных элементов. В основе клеточной терапии лежит трансплантация различного клеточного материала (эмбриональных стволовых клеток, аутологичных и аллогенных стволовых клеток взрослого организма, фетальных прогениторных клеток) внутривенно, в сосуды питающие орган - мишень, интраорганно. Также предлагают вводить клетки на различных носителях. К настоящему моменту опубликовано большое количество работ, как по биологии стволовых клеток, так и по их экспериментальному использованию в качестве агентов клеточной терапии. Разрабатываются и апробируются клинические протоколы с применением стволовых клеток. Клеточная терапия инфаркта миокарда, как и любой другой патологии, – современный метод лечения, эффективность которого ещё предстоит доказать.
