Технология обработки пуповинной крови

Забор пуповинной/плацентарной крови
Забор пуповинной крови осуществляется специально обученным персоналом родильного дома или специалистом банка стволовых клеток. Процедура сбора пуповинной крови очень проста: сразу после рождения ребенка пуповина пережимается зажимом и пересекается. Врач обрабатывает пуповинный канатик дезинфицирующими растворами, чтобы уменьшить риск контаминации. Далее доктор пунктирует пуповинную вену иглой, подсоединенной к стерильной системе для забора крови. Кровь из пуповины и плаценты самотеком поступает в контейнер с антикоагулянтом – специальным веществом, препятствующим свертыванию крови.
Вся процедура занимает несколько минут. При естественных родах забор может осуществляться как до рождения плаценты, так и после. В случае родоразрешения методом кесарева сечения, забор пуповинной крови происходит только после отделения плаценты.

Маркировка стволовых клеток
Как только контейнер с пуповинной кровью поступает в нашу лабораторию, ему сразу же присваивается уникальный идентификационный номер – штрих-код, который также проставляется на всю документацию и расходные материалы, в которых будет происходить дальнейшее хранение.

Тестирование крови на стерильность и типирование
В нашей в лаборатории до начала выделения стволовых клеток, из каждого образца собранной крови отбирается около 8 мл для проведения лабораторных тестов и типирования.
Типирование – анализ клеточного состава пуповинной крови - проводится на современном проточном цитофлуориметре. После проведения типирования будет определено количество стволовых клеток и общее количество клеток в образце.
Следующим этапом проводится тестирование крови наличие вирусных и бактериальных инфекций. Отобранная в лаборатории кровь отправляется в сертифицированную лабораторию, где проводят анализы. Если результаты всех тестов отрицательны, то кровь перемещается на постоянное хранение, а Вам заказным письмом с уведомлением или курьером отправляется Паспорт пуповинной крови. Если положительным окажется результат микробиологического «посева», то кровь будет помещена на хранении после Вашего согласия, а в случае выдачи клеточного материала, он будет дополнительно обработан специалистами нашего Банка. Наличие бактериальных агентов в материале не влияет отрицательно на хранение и применение данного материала. При получении положительного результата RW, Anti-HCV, HBs-Ag, Anti-HIV–1, -2 будет дополнительно отобран еще один образец для проведения лабораторного тестирования в референсной лаборатории. При повторном получении положительного анализа кровь будет утилизирована в соответствии с Приказом Министерства Здравоохранения РФ о 25 июля 2003 года № 325, и Вам будет направлено уведомление с результатами анализов, если результат отрицателен образец будет помещен на постоянное хранение.

Выделение стволовых клеток 
Забор стволовых клеток из пуповинной крови - многоэтапный процесс. Все манипуляции с клеточным материалом проводятся в специальных сертифицированных «чистых» помещениях, оснащенных системой подачи чистого воздуха. Квалифицированные специалисты работают с применением только одноразовых материалов. После того, как отобран материал для тестирования и типирования. В пакет с пуповинной/плацентарной кровью вводят специальные реагенты для осаждения эритроцитов. После осаждения эритроцитов фракцию, содержащую гемопоэтические стволовые клетки, при помощи плазмоэкстрактора отделяют от эритроцитарного осадка. Контейнер с эритроцитами удаляется. Пакет с клеточной массой центрифугируют, для отделения излишков плазмы. К клеточной массе добавляют криопротекторы, которые защищают клетки от гибели при замораживании.

Расфасовка стволовых клеток
Один из последних этапов в работе с клеточным материалом это помещение выделенных и обработанных стволовых клеток в специальные пакеты для заморозки, предварительно отобрав по 2 мл для каждой ампулы - спутника. Пакет и ампулы спутники помещаются в специальный программный криозамораживатель, в котором они постепенно охлаждаются до температуры -80˚С, далее хранение производится в парах жидкого азота при температуре -196˚С.

Карантинное хранение
После полной заморозки пакет с клетками и ампулы-спутники помещают в карантинное криохранилище. Карантинное хранение осуществляется до получения результатов лабораторных тестов о чистоте клеточного материала. После получения отрицательных результатов лабораторных тестов на вирусные инфекции проверенные по всем показателям образцы перемещаются на постоянное хранение, при этом Вам отправляется паспорт пуповинной крови с полной характеристикой хранящегося материала.

Хранение стволовых клеток
По истечении срока карантинного хранения, когда проведены все необходимые тесты, пакет с клетками и ампулы-спутники перемещается на постоянное хранение в криохранилище. В течение многих лет клетки будут храниться в так называемых криобоксах, где в парах жидкого азота при температуре -196˚С будут находится маркированные пакеты. При сверхнизких температурах клетки могут сохранять свою жизнеспособность и биологическую активность в течение длительного, практически неограниченного времени.